饲料产品质量安全检测方法大全
1.2 色谱分析技术
色谱分析的基本原理是让混合物通过互不混溶的两相,由于各组分的结构、性质不同,因此可以在两相中进行分离。饲料检测中应用的色谱仪器主要有气相色谱仪和液相色谱仪。
我国国家标准中规定的饲料中农药残留如有机磷(GB/T18969—2003)、除虫菊酯类(GB/T19372—2003)、氨基甲酸酯类(GB/T19373—2003)等大多数农药残留的检测均采用气相色谱分析方法。随着饲料中油脂的添加,对油脂质量及种类的检测逐渐成为关注的重点,因此开始应用气相色谱对饲料中脂肪酸种类及含量进行检测,以确定饲料中油脂的组成。此外饲料香味剂的检测主要包括对其香气、理化指标、稳定性和有效性等进行检测,由于香味剂是非常复杂的化合物,在国外多采用气相色谱-质谱联用技术进行定性定量分析。我国对香味剂的碱性主要是对其中味料部分的一些成分进行检测,如谷氨酸钠、肌苷酸、鸟苷酸、糖精钠、葡萄糖等采用高效液相色谱方法进行检测;对于香气部分如含有丁酸乙酯、乳酸乙酯、香草醛等成分采用气相色谱进行检测。饲用防霉剂目前国内外普遍采用气相色谱或高效液相色谱方法进行检测,有些方法直接采用食品添加剂检测标准方法,例如饲用防霉剂中的脂肪酸类物质,包括甲酸、乙酸、丙酸、山梨酸、苯甲酸等采用气相色谱技术,用有机溶剂丙酮/石油醚等提取,经过离心净化,通过色谱柱或毛细管柱的分类,用电子捕获、氢焰等检测器进行定量测定。饲用抗氧化剂是添加到饲料中,能够阻止饲料或延迟饲料氧化,提高饲料稳定性和延长贮存期的一类物质,常用的有乙氧基喹啉、二丁基羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)等。对于抗氧化剂的检测技术多采用高效液相色谱或气相色谱技术进行分析。如饲料中BHA、BHT的检测采用液相色谱技术,经乙烷溶解提取、乙腈萃取浓缩,异丙醇稀释后注入高效液相色谱仪中进行分离检测,用紫外检测器进行定量分析。乙氧基喹啉、BHT也可以采用气相色谱方法,经毛细管柱分离,用氢焰检测器测定其含量。
液相色谱在饲料检测中的应用十分广泛,例如饲料中维生素的反相高效液相色谱分析方法已经列为国家标准分析方法。氨基酸的检测从以氨基酸分析仪为主逐步转向普遍采用的高效液相色谱方法:经邻苯二甲醛(OPA)和异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生后,经C18柱分离,紫外或荧光检测器进行检测。该方法的分析时间短,灵敏度高,极易在大中型饲料厂中普及应用。液相色谱还广泛应用于饲料中药物的检测,随着国家对饲料安全问题的重视,饲料标准化委员会组织制定了大批饲料中违禁药物的检测方法,如饲料中盐酸克伦特罗、呋喃唑酮、磺胺喹恶啉、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、盐酸氯苯胍等,饲料中西马特罗、地西泮、苯巴比妥、氯丙嗪、己烯雌酚、雌二醇、玉米赤霉烯酮、氢化可的松、氯霉素、金霉素、土霉素、氯苯胍、喹乙醇、莫能菌素、拉沙络西钠、杆菌肽锌、氯羟吡啶、尼卡巴嗪、盐霉素、林可霉素、百里霉素、盐酸氨丙啉、二甲硝咪唑等等,大部分采用液相色谱或液相色谱-质谱联用技术进行分析。此外,也进行了一些饲料中药物尤其是违禁药物的分析研究工作,如Wang等(2010)通过固相萃取等净化技术,对饲料中硝呋烯腙进行液相色谱分析,检出限达到0.05mg/kg,定量限为0.2mg/kg。对饲料中多种药物的同步检测分析是现今饲料分析技术的主流方向之一。Shen等(2009)应用高效毛细管电泳测定了饲料中5种苯并咪唑类药物,检出限低于2mg/kg,所有药物的回收率均大于73%,变异系数低于10%。Galarini等(2009)应用液相色谱荧光检测器和紫外检测器检测了饲料中的11种喹诺酮类药物,检出限为0.04~0.8mg/kg,回收率为69%~98%,变异系数低于10%。Driver等(2009)用柱后衍生离子交换色谱荧光检测了饲料中的新霉素B和新霉素C,在治疗剂量的饲料产品中新霉素含量范围为50%~0.005%(质量比,以新霉素为基础计)时,新霉素B平均回收率是100.4%,变异系数2.28%,新霉素C的回收率是97.5%,变异系数4.36%,均有良好的分析效果。
应用液相色谱对饲料调质剂的检测分析逐渐推广。饲料调色剂或者着色剂有天然提取的色素和人工合成色素,主要采用液相色谱仪器进行定量分析。如饲料中叶黄素的检测,目前精确测定的最可靠方法是高效液相色谱方法,根据1984年美国公职分析化学家协会(AOAC)提出柱层析色谱法测定总叶黄素,直接用分光光度计进行检测。我国2008年上半年出台了饲料添加剂叶黄素检测的国家推荐标准GB/T21517—2008,比柱层析方法更加简单,操作步骤少,大大提高了叶黄素检测工作的推广。
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