饲料产品质量安全检测方法大全
2.2 以检测DNA 为基础的方法
以DNA为基础的检测技术主要有核酸探针杂交、DNA指纹分析、PCR-RELP分析、PCR特异扩增(常规PCR方法和Real-timePCR方法)。主要原理都是对各种物种内特异的核酸序列进行提取、鉴定,从而判定饲料内有无该物种的成分。其中PCR特异扩增方法由于其简单、快速、特异性强的特点,成为目前最广泛应用的方法,特别是荧光PCR的应用使得检测的特异性和敏感性更高。我国也于2008年4月1日颁布实施了应用PCR方法定性检测动物源性饲料中动物成分的标准,包括骆驼源性成分、狗源性成分、哺乳动物源性成分、猪源性成分、兔源性成分、鹿源性成分和马、驴源性成分的PCR定性检测,为进一步规范和监督动物源性饲料的安全使用提供技术支持。
Cawthraw等(2009)应用实时PCR测定动物饲料中禁用的哺乳类及禽类成分,饲料中含有1%的肉骨粉时检测其中的16SrRNA可以进行鉴别。用mtATP6作为靶序列,应用PCR探针技术检测饲料中的猪源成分,以PPA8和PPA6作为检测DNA,检出限可以分别达到0.01%和0.001%,这种方法已经在日本的饲料检测中应用(Shinoda等,2008;Yoshida等,2009)。
2.3 微生物的检测
饲料中污染微生物的危害主要产生在以下四个方面,一是含有致病性微生物如沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌等而使动物产生疾病;二是微生物的繁殖使某些营养成分如脂肪、动物蛋白产生腐败作用;三是非致病性微生物寄生于饲料中,消耗饲料中的养分,使饲料营养价值下降;四是某些微生物会产生毒素如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、肉毒毒素、金黄色葡萄球菌肠毒素等,动物食用含有这些毒素的饲料后会产生危害。目前微生物的检测技术发展很快,利用了包括微生物学、分子化学、生物化学、生物物理、免疫学和血清学等领域的知识,其目的是建立可用于微生物计数、早期诊断、鉴定等方面的快速检测技术。除常规的平板培养外,目前已有商品化的基因探针试剂盒,如GENE-TRAKSystemsDNA杂交筛选法(AOAC方法:987.10,990.13)。李斯特氏菌、沙门氏菌、弯曲杆菌等均有DNA探针的试剂盒。目前,已经有了全自动化的PCR检测试剂盒及仪器,如美国杜邦快立康公司的BAX病原菌检测系统。可用于检测沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7等致病菌。荧光酶免疫分析筛选方法是在EIA基础上加入荧光标记的酶底物,用荧光计检测荧光度值来判断结果。如沙门氏菌荧光酶免疫分析研究筛选方法是基于EIA测定沙门氏菌抗原。沙门氏菌多克隆免疫色度分析筛选方法已有许多试剂盒,由澳大利亚BioenterrisesPtyLtd和美国BioControlSystems,Inc研制的多克隆免疫试剂盒,都已获AOAC认可。Koyuncu等(2010)建立了以PCR为基础的商业化沙门氏菌enterica检测,当每25g饲料中含有1个沙门氏菌enterica时的检测结果与培养法相近,该方法与平板培养的灵敏度及专属性基本一致。但也会有一些PCR检测阳性的饲料中并不能分离出沙门氏菌,因此PCR方法目前还不能完全替代平板培养法,但可以用来进行流行病学调查研究的方法。
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