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体外法评定反刍动物饲料营养价值方法汇总

2014-5-15 饲料人才网
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2 短期瘤胃法
    Bell(1953)建立了“一级离体消化法”,该法是以试管培养瘤胃液和饲料样品,模拟瘤胃消化评定饲料的可消化性,并用此法进行了羊饲料的营养价值评定。Tilley和Terry(1963)在此基础上提出了改进后的两步法。即将饲料在瘤胃液中培养48h后再用胃蛋白酶培养48h,以模拟真胃和部分小肠的消化过程,培养结束后分离出残渣进行分析。进一步改进改用纤维素酶代替瘤胃液,第一阶段用纤维素酶,第二阶段用胃蛋白酶,此法经过大量实验证明与传统的体外法所得到的结果相似。

 Yahaya等(2001)应用体外两步法来评定3种热带树嫩枝叶饲料的消化率和降解率,以求评价这些饲料能否作为小反刍动物长期供应的单一日粮或补充日粮。但两步法不能测定牧草的动态消化率。因发酵终产物不能外移,与反刍动物瘤胃食糜外排的生理规律不相符,也影响测定结果的稳定性和准确性。
3 人工瘤胃持续发酵法(长期瘤胃法)
    人工瘤胃持续发酵法与体外产气法相比,能更准确的模拟瘤胃环境。该法可将人工瘤胃中产生的发酵产物持续排出,以维持发酵罐内稳定的环境,且保持几周的稳定发酵,是评定饲料动态降解率较好的实验方法。任鹏和冯仰廉(1989)用长期瘤胃发酵法测定了6种饼粕饲料蛋白质的降解率,其测定结果的稳定性优于尼龙袋法,平均变异系数为2.7%,结果与尼龙袋法的结果高度相关(R2=0.99)。持续发酵法还可研究体外碳水化合物发酵规律,进行消化率、VFA产量、氨浓度、微生物蛋白合成量等指标的综合评定。因仍需要对实验动物安装瘘管且操作繁琐,用作蛋白质降解率的常规评定方法受到了一定的限制。目前较为成功的装置有Czerawski(1986)建立的Rusitec、Hoover(1989)研制的CC、王加启和冯仰廉(1993)研制的瘤胃持续模拟装置(RSI)等。人工瘤胃装置没有象瘤胃壁那样的半透膜来吸收产物,可能是该法与体内法在发酵时出现矛盾的地方。尽管如此,该方法对瘤胃代谢和反刍动物饲料的研究很有价值。
4 酶解法
    酶解法是用酶溶液代替瘤胃液对饲料营养价值进行评定的一种方法。目前主要有单-胃蛋白酶或单-纤维素酶酶解法和蛋白酶-纤维素酶的复合酶解法。20世纪80年代以来,国内外越来越重视利用酶解法评定蛋白质降解率的研究。熊文中(1989)报道,用酶解法测定反刍动物饲料有机物质降解率和评定饲料的营养价值具有一定的可靠性。酶解法的最大优点是不需要动物作为实验供体。颜品勋(1995)用胃蛋白酶酶法评定青粗饲料蛋白质降解规律,以尼龙袋法结果作参照,结果表明,用单一胃蛋白酶法能较好地估测瘤胃尼龙袋法蛋白质降解率。如果对粗饲料进行分类估测,则可明显提高酶解法与尼龙袋法的相关。Kopecny等(1998)在对瘤胃未降解蛋白中蛋白质消化率的研究中发现,尼龙袋法和酶解法有较高的相关性,且均与体内法的相关性较高。李树聪等(2001)研究表明,由于酶的特异性,用单一酶或少数几种酶构成的复合酶很难模拟瘤胃中微生物对蛋白质的复杂消化过程。酶解法的优点还有:不需要瘘管动物、定环境易于标准化、稳定性高、实验室之间可比性强、能大批量进行操作、效率高、成本较低。酶法所得到的结果往往不能很真实地反映体内的情况。
5 溶解度法
    溶解度法是根据饲料在缓冲溶液或相似溶剂中的溶解度来评定饲料蛋白质降解率的方法。
    常用溶剂有热蒸馏水、硼酸-磷酸盐溶液、70%乙醇、Burrough缓冲液、McDougal、人工唾液、NaCl溶液和蒸煮过的瘤胃液等。同一种蛋白质在不同溶剂中的溶解度不同,受到溶剂的化学组成、离子浓度、湿度和pH的影响,这使得溶剂的选择变得很困难,从而使其在应用上受到一定限制。
6 近红外反射光谱技术(NIRS)
    NIRS的原理是在0.7~2.5μm这段近红外光谱区内,饲料有机成分对近红外光有选择性的吸收,不同有机成分的吸收光谱不同,各种成分有着各自特征频率和特征吸收谱带。同一成分也因含量高低而对近红外光的吸收强弱有一定差别,特征吸收谱带的强度与有机成分含量成正比关系。根据饲料中的有机成分对近红外光的特征吸收,建立光谱值与含量之间的相关关系。丁丽敏等(2002)就NIRS和粗蛋白质预测氨基酸含量的精度进行了比较研究,证明NIRS的预测性能优于以粗蛋白质为自变量的预测方程的预测性能,在预测氨基酸含量方面具有其他方法无可比拟的优势。穆怀彬(2008)研究表明,采用近红外技术对青贮玉米营养品质、青贮品质、粗饲料品质的综合研究,均具有较好的判断效果,大大简化了常规分析方法,可以实现对常规分析方法的取代,近红外技术是青贮玉米综合品质的快速检测手段。NIRS估计饲料营养物质消化率必须建立在大量的准确的原始数据之上,否则估测值将与实测值差距很大;另外该技术本身在精度上不及湿法分析,但不同等级同类牧草之间存在的只是该方法带来的系统误差,具有相对可比性。

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