2013-09-2015-06,华中农业大学,预防兽医专业,硕士 2013.07-2014.03 猪肺炎支原体P36蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 将pET-28a(+)-P36成功转入大肠杆菌BL21(DE3),优化表达条件以可溶性形式高效表达;使用AKTA FPLC(Amersham Biosciences UPC-900)快速纯化液相色谱系统对蛋白进行Ni柱亲和纯化;复苏培养Mhp168株F109代,进行CCU测定,制备Mhp全菌蛋白用于后续单抗筛选与验证;通过免疫小鼠、细胞融合、有限稀释法克隆阳性细胞孔、Western blot验证特异性得获得杂交瘤细胞株;采用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法对在小鼠体内诱生的腹水进行纯化,获得4株高效价高纯度的单抗。 2014.03-2014.05 建立猪肺炎支原体双抗体夹心ELISA与荧光定量PCR检测方法 HRP酶标单抗,使用Mhp全菌蛋白建立优化双抗体夹心ELISA,但无法检测到临床鼻拭子样品中的Mhp;设计Mhp P36基因的荧光定量引物和探针,成功建立FQ-PCR标准曲线,但敏感性不高,课题中断。 2014.06-2015.03 按照新兽药申请材料开展猪肺炎支原体间接ELISA检测试剂盒的研发 成功表达纯化多批Mhp的三联融合蛋白,用作包被抗原建立间接ELISA,增加检测方法的敏感性;摸索ELISA方法的最佳反应条件,判定阴阳性界值,评价方法的特异性、敏感性、重复性和稳定性;将所建立的ELISA方法与IDEXX试剂盒共同检测大量临床血清样品,结果符合率高。 2008-09-2013-06,华中农业大学,动物医学专业,本科 2012.11-2013.04 猪圆环病毒2型 ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其优化 PCR扩增ORF2基因,成功构建pVL1392-ORF2表达质粒;熟悉掌握Sf9昆虫细胞的传代培养;将表达质粒与线性化杆状病毒DNA共转染Sf9,经多次扩增获得高滴度的重组病毒;Western blot检测不同感染复数下细胞培养液上清和细胞内的蛋白表达量。
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