酶联免疫吸附测定法ELISA 技术在畜牧业中的应用

  畜牧业是一个承工启农的 中轴产业, 既可促进种植业, 又能带动加工业和服务业, 形成农业内部产业和三次产业间的良性循环, 促进农产品的转化增值。近年来, 我国畜牧业呈现出加快发展势头, 截至2009 年, 畜牧业产值已占农业总产值的34%, 畜牧业发展快的地区, 畜牧业收入已占到农民收入的40% 以上, 畜牧业已由传统的家庭副业发展成为农村经济的主导产业和农民增收的重要渠道, 但动物传染性疾病诊断、食物添加剂、药物残留等方面存在的问题制约着畜牧业向更深层次发展。酶联免疫吸附测定法( Enzyme- Linked Immunosorbent A ssay, ELISA) 是免疫学诊断中的一项新技术, 由于其具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点 。随着单克隆抗体技术的发展应用及免疫试剂盒的商业化, ELISA 不但应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫学诊断, 也应用于分子抗原和抗体的测定, 其应用范围日益扩大, 目前ELISA 已广泛应用于临床医学、生物化学、分析化学、食品分析等领域, 但在畜牧业方面的应用, 国内目前尚未广泛使用。本文通过对ELISA 在畜牧行业中应用的介绍, 旨在促进该技术在畜牧行业的应用和推广。
1  ELISA 的原理、特点及分类ELISA 的理论基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。固相载体表面的抗原或抗体包被后可保持其免疫学活性, 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性, 又具有酶的活性。在测定时,受检标本( 测定其中的抗体或抗原) 与固相载体表面的抗原或抗体发生免疫反应, 洗涤后, 可使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开, 再加入酶标记的抗原或抗体, 也通过特异反应而结合在固相载体上, 这时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定比例, 加入酶反应底物后, 底物被酶催化成为有色产物, 产物的量与标本中受检物质的量直接相关, 故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。ELISA 技术与经典的化学、生物学的检测方法比较, 具有以下特点: 敏感性强, 检测限可达ng 甚至pg 水平, 可作定量测定; 外界干扰小、抗原抗体的免疫反应特异性高, 非特异性反应少, 结构类似物、有色物质等对检测的干扰很小; 操作简便快捷、检测速度快, 由于特异性强, 简化了样品的预处理和提取纯化过程, 一次可检测大批标本; 安全性高, 污染少, 因为灵敏度高, 标准品的浓度可以很低, 有机溶剂用量较少, 减少对检测人员和环境的潜在危害。是当前发展最快、最容易、试剂盒应用最广的一项新技术,目前已被广泛用于各种疾病的实验室诊断。在实际应用过程中, ELISA 经不断改进, 根据试剂的来源、标本的情况及检测的具体条件, 设计出各种不同类型的分析方法, 目前主要有: 双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞争法测抗原、捕获包被法测抗体等多种方法。

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